Ensayos de Activación de Proteína G

Miden la forma unida GTP de la proteína de un extracto celular o de un tejido.

Disponible en Perlas Desplegables” (pull-down) y G-LISA


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Descripción

Ensayos de Activación de Proteína G

Los ensayos de activación del Cytoskeleton son herramientas útiles que tienen más de 500 citas en los últimos cinco años.

Los ensayos de activación de proteínas G de la marca Cytoskeleton, miden la forma unida GTP de la proteína de un extracto celular o de un tejido.

  • Los ensayos de activación están disponibles en dos formatos: el formato tradicional de “Perlas Desplegables” (pull-down) y nuestro formato avanzado “G-LISA” basado en ELISA.
  • Mida  Arf1 ,  Cdc42 ,  Rac ,  Ral ,  Ras y  Rho
  • Formatos precisos, sensibles y  fáciles de usar
  • Los ensayos de activación más confiables y citados disponibles
  • A continuación podrá obtener más información sobre qué formato es el adecuado para su investigación

 

Ensayos de Activación G-LISA

Las ventajas de los ensayos de activación de G-LISA incluyen:

  • Alta sensibilidad y precisión
  • Resultados en 3 horas
  • Formato flexible
  • Se requiere una pequeña cantidad de material
  • Compatible con células y tejidos de ratón, rata y humanos
Catálogo Descripción Cantidad (ensayos)
CYTOS11700   BUNDLE RhoA / Rac1 / Cdc42 Activation Assay G-LISA Kits 24
BK132   Arf1 Activation Assay G-LISA Kit; Colorimetric 96
BK133   Arf6 Activation Assay G-LISA Kit; Colorimetric 96
CYTOS11680   Cdc42 Activation Assay G-LISA Kit; Colorimetric 96
CYTOS11685   Cdc42 Activation Assay G-LISA Kit; Colorimetric 24
BK125   Rac1,2,3 Activation Assay G-LISA Kit; Colorimetric 96
CYTOS11690   Rac1 Activation Assay G-LISA Kit; Colorimetric 96
CYTOS11695   Rac1 Activation Assay G-LISA Kit; Colorimetric 24
BK126   Rac1 Activation Assay G-LISA Kit; Luminescence 96
BK129   RalA Activation Assay G-LISA Kit; Colorimetric 96
BK131   Ras Activation Assay G-LISA Kit, Colorimetric 96
CYTOS11670   RhoA Activation Assay G-LISA Kit; Colorimetric 96
CYTOS11675   RhoA Activation Assay G-LISA Kit; Colorimetric 24
CYTOS11665   RhoA Activation Assay G-LISA Kit; Luminescence 96

 

Ensayos de Activación de Perlas Desplegables (Pull-Down) 

Estos ensayos utilizan perlas de afinidad unidas a  una proteína efectora que se une selectivamente a la GTPase activa, seguida de cuantificación de transferencia Western  con anticuerpos altamente específicos de isotipo. Estos ensayos son compatibles con lisados ??de células y tejidos de ratón, rata y humanos.

Se incluyen todos los reactivos. Además, se encuentran disponibles para la compra individual pequeñas perlas de afinidad de proteína G, anticuerpos, proteínas, activadores e inhibidores.

Catálogo Descripción Cantidad (ensayos)
CYTOS11630   COMBO RhoA/Rac1/Cdc42 Pull-down Activation Assay 10
BK032-S   Arf1 Pull-down Activation Assay 20
BK033-S   Arf6 Pull-down Activation Assay 20
BK034   Cdc42 Pull-down Activation Assay 50
CYTOS11635   Cdc42 Pull-down Activation Assay 20
CYTOS11640   Rac1 Pull-down Activation Assay 50
CYTOS11645   Rac1 Pull-down Activation Assay 20
BK040   RalA Pull-down Activation Assay 50
CYTOS11615   Ras Pull-down Activation Assay 50
BK008-S   Ras Pull-down Activation Assay 20
CYTOS11650   RhoA Pull-down Activation Assay 80
CYTOS11655   RhoA Pull-down Activation Assay 20

Información técnica

Esta tabla describe algunas consideraciones importantes a la hora de decidir qué ensayo de activación de GTPase es el adecuado para usted y resume los puntos de decisión clave al elegir entre Pull-downs y G-LISA como un medio para medir la activación de proteínas G.

Si requieres una atención personalizada contacta a nuestro asesor científico al correo asesorsenna@cientificasenna.com

Factor de Ensayo Pull-Down Tradicional G-LISA Recomendaciones
Principio de ensayo
  • Utiliza perlas de afinidad recubiertas con una proteína efectora para unir selectivamente la GTPasa activa.
  • La señal se analiza mediante Western Blot.
  • Utiliza una placa de 96 pocillos recubierta con una proteína efectora para unir selectivamente la GTPasa activa.
  • La señal se analiza mediante un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA).

Los ensayos de extracción tradicionales utilizan métodos familiares para la mayoría de los laboratorios y, por lo tanto, proporcionan un punto de entrada familiar.

El ensayo G-LISA es fácil de usar y tiene muchas ventajas que deben tenerse en cuenta (consulte las comparaciones a continuación).
Equipo
  • Aparato SDS-PAGE
  • Aparato de Western blot
  • Agitadores de placas orbitales (2)
  • Espectrofotómetro (ajustado a 490 nm)
  • Pipeta multicanal (recomendada si se manipula una gran cantidad de muestra)
 Tenga en cuenta los requisitos del equipo antes de decidir sobre un formato de ensayo.
Material de partida requerido por ensayo 300 – 2000 µg por ensayo 5 – 50 µg por ensayo Si el material de partida es limitado, por ejemplo, células primarias, se requiere el ensayo G-LISA.
Costo Disponible como:

  • Kit combinado (10 ensayos cada uno RhoA / Rac1 / Cdc42)
  • Kit de inicio (20 ensayos)
  • Kit regular (50-80 ensayos según la proteína diana)
 Disponible en formato de 96 pocillos. Cada pozo puede romperse y usarse individualmente. Temas de costos a considerar:

 

Costo por ensayo : G-LISA es el mejor valor por ensayo.

 

Costo por kit : los kits de inicio de ensayo desplegable tradicionales generalmente ofrecen el menor costo por kit.  NOTA: Considere el kit combinado como una opción rentable.

 
Manejo de muestras Los pasos de centrifugación y el análisis de transferencia Western hacen que este ensayo sea el más adecuado para números de muestra bajos (?10). Apto para un gran número de muestras (> 10) o análisis de respuesta a la dosis / curso temporal. Los pozos se pueden separar y utilizar individualmente. <10 muestras: cualquier ensayo

> 10 muestras: se recomienda G-LISA

NOTA: A menudo se recomiendan las respuestas a las dosis y los cursos de tiempo, lo que aumentará considerablemente el número de muestras que se analizan.
Cuantificación de resultados La cuantificación de la transferencia Western tiene un rango lineal muy estrecho. Además, múltiples manipulaciones de las muestras dan como resultado un ensayo algo variable. Proporciona una lectura numérica simple Se recomiendan los ensayos G-LISA para una cuantificación de resultados simple y reproducible.
Reactivos necesarios que no están en los kits
  • Lisado de células o tejidos
  • Reactivo de cuantificación de proteínas
  • Anticuerpo secundario anti-ratón
  • Buffers SDS-PAGE
  • Geles SDS-PAGE
  • Marcadores de peso molecular
  • Buffers de Western blot
  • Reactivos de detección de Western blot
  • Lisado de células o tejidos
 El ensayo G-LISA proporciona todos los reactivos necesarios para realizar 96 ensayos de activación. Los pozos se pueden separar y utilizar individualmente.

Valoraciones

  1. Noa –

    Muchas gracias por la información. Gran aporte de esta web. Reciba un cordial saludo!

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