Información técnica

La calidad del kit se prueba lote por lote, aislando el ADN plasmídico de un cultivo de E. coli (DH5?) nocturno de 4 ml , que contiene el plásmido pBluescript (A600> 2U / ml). Después del proceso de purificación, se espera un rendimiento de más de 20 µg y la relación de A260 / A280 está entre 1.7-1.9. El plásmido purificado (1 µg) se usa en la digestión con EcoRI y se verifica por electroforesis.

Especificaciones	Información
Formato	Columna de giro
Capacidad	30 ug
Entrada de muestra	1-5 ml
Tipo de muestra	Células bacterianas cultivadas
Tamaño del plásmido	1-15 kb
Rendimiento tipico	10-30 ug
Volumen de elución	30-100 µl
Tiempo de operación	<15 minutos

¿Es necesario el uso de ampicilina u otros antibióticos durante el cultivo de E. coli para lograr un rendimiento adecuado con el kit de mini plásmido IBI? 

Sí, para lograr un buen rendimiento, la E. coli debe ser estresada con un antibiótico.

¿Cómo aumento el rendimiento de este kit? 

1. Aumente su tiempo de lisis 2. Precaliente el buffer de elución 3. Realice el paso de elución dos veces 4. Con una muestra grande / concentrada, el usuario final puede agregar buffer PD1,2,3 adicionales

¿Cuál es la cantidad máxima de muestra para la columna / tubo Mini Plasmid? 

La cantidad máxima de muestra para la columna / tubo es de 4 ml.

¿Cuál es la composición principal del buffer de elución? 

La composición principal del tampón es Tris-HCl pH 8.5. Este buffer no contiene EDTA. También puede usar Pure Water o TE buffer.

¿Se puede aplicar el kit de extracción de ADN plasmídico en bacterias Gram (+)?

Nuestros kits de plásmidos están diseñados principalmente para extraer ADN plasmídico de bacterias Gram (-) como E. Coli. Las bacterias Gram (+) tienen paredes celulares más gruesas, por lo que los buffer de lisis celular proporcionados en el kit no los lisan fácilmente. Sin embargo, la extracción del ADN plasmídico de las bacterias Gram (+) todavía se puede lograr con un tratamiento adicional. Después de resuspender las células bacterianas granuladas en el Tampón PD1, agregue lisozima para obtener una concentración final de 3 a 5 mg / ml. Incubar la suspensión a 37 ° Celsius durante 30-60 minutos (o por un tiempo más corto cuando se usa 5 mg / ml de lisozima). Este tratamiento debilita la pared celular de la bacteria Gram (+). Agregue PD2 y siga el resto del protocolo. Para ciertas bacterias Gram (+) con paredes celulares delgadas, como Lactobacillus, la aplicación de una cantidad doble de PD1, PD2 y PD3 Buffer puede ser suficiente para lisar las células. Todavía,

¿Cuál es la diferencia y / o el propósito del W1 Buffer frente al Wash Buffer? 

W1 contiene sal caotrópica y etanol. La sal caotrópica puede inhibir y eliminar la actividad enzimática, como la polimerasa Taq y la endonucleasa. Wash Buffer contiene bajas concentraciones de sal y eliminará sales y proteínas de la muestra final.

¿Se aumentó el volumen de ARNasa A en los kits de mini plásmidos? 

Sí, la cantidad de ARNasa A se duplicó el 9-23-14. La concentración se mantuvo igual: 50 mg / ml. La cantidad de ARNasa añadida a la botella de 25 ml de PD1 es ahora de 100 µl. La cantidad de ARNasa añadida al frasco de 65 ml de PD1 es de 260 µl. Esto es el doble de lo que era. Esto es para secuenciar el ADN plasmídico de grado.

¿Cuál es la diferencia entre el kit de mini plásmido Hi-Speed ??y los kits de mini plásmido I-Blue? 

Las diferencias son 2 veces el volumen de RNAsa A y el buffer de lisis I-Blue en el I-Blue Mini. El mayor volumen de ARNasa A aumenta el rendimiento para volúmenes de muestra más grandes. Hi Speed ??Mini permite 1-5 ml y el I-Blue Mini permite 1-7 ml que producirán más ADN plasmídico. Todos los demás buffer son iguales.